双标记选择载体转染牛胎儿成纤维细胞方法的建立

被引：2

作者：

龚国春

戴蕴平

樊宝良

赵春江

王莉莉

王海平

郑敏

李宁

机构：

[1] 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京,北京,北京,北京,北京,北京,北京,北京

来源：

自然科学进展 | 2002年 / 12期

关键词：

双标记选择载体; 牛; 胎儿成纤维细胞; 电击; 基因转染;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

以经SspI和BamHI对所构建的双标记选择载体质粒pCE-EGFP-IRES-Neo-dNdB双酶切后的线性目的DNA为外源基因,对电击介导的牛胎儿成纤维细胞基因转染方法的效率进行了优化。实验结果表明,当电场强度为1.2kV/cm、脉冲时间为1ms时可获得约50个阳性细胞克隆/10～5个细胞的最佳转染效率,通过牛胎儿成纤维细胞对不同浓度G418抗性的敏感性实验确定800μg/mL G418为快速筛选浓度,以300μg/mL G418为维持筛选浓度,从两个牛胎儿成纤维细胞系中共分离了56个绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞克隆,从中选取2个冷冻保存,经PCR检测,证实2个冷冻克隆株均含有所转染的外源基因。

引用

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