为建立分离纯化、大量扩增人骨髓间充质MSC ,改进其冰冻保存的方法 ,并初步探索其体内向软骨细胞分化的最佳方法 ,以Percoll(1 0 73g/ml)密度梯度离心法分离人骨髓中单个核细胞 ,用含经筛选的 10 %的胎牛血清的低糖DMEM体外培养扩增骨髓干细胞(MSC) ,FCM鉴定细胞纯度 ,传代 2次以后的细胞吸附于明胶海绵内 ,以TGF β为主要刺激因子体外诱导 1周 ,植入裸鼠皮下。在不同的时间取出组织块 ,甲苯胺蓝染色显示细胞外基质。结果发现 ,体外培养扩增的人间充质MSC表达CD166、CD2 9、CD44等表面抗原 ,不表达CD3 4、CD45、HLA DR等抗原 ;MSC可以不经消化 ,直接在原培养瓶内冻存在 -70℃低温冰箱 ,3个月后复苏的细胞生物学特性没有明显改变 ;体外诱导的细胞植入裸鼠皮下 4周后即出现软骨细胞特有的结构。说明骨髓MSC具有独特的生物学特征 ,体外培养的MSC具有体内成软骨能力 ,应用MSC构建软骨组织具有一定的可行性