一步单管反转录PCR检测水中甲型肝炎病毒

以往甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）的检测主要依赖细胞培养法，但此法所需时间长、敏感性低、特异性不强。虽然反转录ＰＣＲ等技术已被用于粪便或食品中ＨＡＶ的检测，但常规反转录ＰＣＲ操作繁琐、污染环节多，极易造成污染，致使实验结果不稳定或出现假阳性结果。为克服ＰＣＲ检测ＨＡＶ的缺点和不足，我们在实验基础上建立了一步单管反转录ＰＣＲ技术检测水中的ＨＡＶ，采用热裂解法提取样品中ＨＡＶ病毒的总ＲＮＡ，反转录与ＰＣＲ反应一步进行，整个反应在一个反应管中进行，操作方法较简单，中间可能污染的环节较少，因此，最大限度的减少了由环境造成的可能污染。我们设计合成的引物（Ｈ１—Ｈ２）在ＨＡＶ病毒核酸的ＶＰ１区，只特异地扩增ＨＡＶ核酸片断，具有较强的特异性。改进后的反转录ＰＣＲ的敏感性与常规反转录ＰＣＲ比有所提高，可检测到细胞培养悬液或水中１０个ＴＣＩＤ＿（５０）的ＨＡＶ。