线粒体膜通透性转换作用对再灌注损伤后肝细胞凋亡的影响

目的观察大鼠肝脏常温缺血再灌注后肝细胞线粒体通透性转换(mitochondrialpermeabilitytransition,MPT)作用及其与肝细胞凋亡的关系;同时观察线粒体膜通透性转换孔(mitochondrialpermeabilitytransitionpore,PTP)开放抑制剂环孢素A(CsA)对MPT的抑制作用,以及对肝细胞凋亡的影响和可能的机制。方法将SD大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组(I/R)、CsA组(I/R+CsA)。CsA组术前连续给予CsA10mg·kg-1·d-1灌胃4d,其余组给予等量生理盐水。大鼠热缺血再灌注模型参考Nauta的方法,热缺血时间60min,分别于再灌注0、1、6、24、72h等不同时相收取肝组织标本,免疫组化法检测细胞质活性caspase3;Westernblot检测胞浆细胞色素C,TUNEL法检测肝细胞凋亡。结果缺血再灌注引起肝细胞线粒体发生MPT作用,细胞色素C由线粒体释放入细胞质,再灌注后0、1、6、24h,I/R组及CsA组与假手术组相比,细胞质caspase3的阳性程度明显增强,肝细胞凋亡明显增多(P<0.01);CsA组与I/R组相比,再灌注1、6h细胞色素C释放显著减少,再灌注1、6、24h,caspase3阳性程度明显下降(P<0.01);再灌注后6、24、72h,细胞凋亡明显减少(P<0.05)。结论缺血再灌注后肝细胞线粒体发生MPT作用可能是引起肝细胞凋亡的关键环节;CsA可能通过抑制PT孔的开放而抑制MPT作用、减少再灌注后细胞色素C释放、抑制caspase3活化、缓解再灌注后大鼠肝细胞的凋亡。