采用高效液相色谱建立了同时测定化妆品中14种禁用着色剂(吖啶黄、溶剂蓝35、溶剂红49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、颜料橙5、颜料红53、氯化五甲基副玫瑰苯胺、苏丹红Ⅱ、氯化六甲基副玫瑰苯胺、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、分散黄3、苏丹红Ⅰ)的分析方法。待测化妆品样品经四氢呋喃分散,并对目标物进行提取后,用含有醋酸铵的甲醇-水混合溶液将基质析出,提取液经离心过滤后,以10 mmol/L的醋酸铵溶液-乙腈作为流动相在Agilent poroshell 120 EC-C18(2.7μm,3.0 mm×100 mm)色谱柱上梯度洗脱进行分离,检测波长为416,514,590 nm。以目标物的色谱保留时间和紫外光谱图进行定性,以色谱峰的峰面积用标准曲线外标法进行定量。在优化条件下,各目标物的线性范围为0.2~20μg/mL,相关系数均大于0.999。14种禁用着色剂的定量下限为3~10μg/g。在低、中、高3个加标水平下,各目标物的回收率为91.3%110.9%,相对标准偏差(RSD)均低于10%。方法准确、简便、灵敏、可靠,可用于化妆品中此14种禁用着色剂的定量测定。