以酶联免疫吸附分析(ELISA)夹心法测定粪样中轮状病毒(RV)实验为模型,将传统双孵式免疫操作变成单孵式,即在包被RV抗体Ab的微孔中同时加入含RV的粪样上清液和辣根过氧化物酶(HRP)标记抗RV抗体共同孵育,其结果在载体表面形成多层酶免疫复合物,以HRP催化鲁米诺-对碘苯酚-过氧化氢化学发光体系作为最终信号检测系统,从而建立起化学发光单孵多层免疫技术(CL-SIMIT).其灵敏度是ELISA的16倍、CL-ELISA的4倍,分别用ELISA、CL-ELISA和CL-SIMIT对32个样品进行测定,阳性检出率分别为12/32、12/32、17/32.其中CL-SIMIT的测定结果更符合临床诊断结果(18/32)。