中国疫苗株鸡痘病毒插入载体的构建与MDV糖蛋白B的表达

在对中国鸡痘病毒疫苗株２８２Ｅ４基因组ＤＮＡ进行克隆与亚克隆的基础上，进一步插入Ｐｌｌ一ＬａｃＺ标记基因，根据蓝斑选择原理筛选出３个为病毒在细胞培养物上生长所不必需的片段。为了便于外源基因的插入，特将Ｐ７．５一Ｐｌｌ一ＬａｃＺ基因框转移至ＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴＳＫＭ１３一的ＢｄｍＨＩ位点，在Ｐ７．５下导人多克隆位点（ＭＣＳ），建立了载体插入标记ｐＳＧＭ１１７５。以ＳｓｔＩＩ和ＡｐａＩ将ＭＣＳ一Ｐ７．５一Ｐｌｌ一ＬａｃＺ框切下，置入一个亚充隆的非必需片段中，构建成中国鸡痘病毒插入载体ｐＦＧ１１７５一１。以ＰｓｔＩ和ＳｍａＩ酶切ｐＶＬｇＢ分离ＭＤＶｇＢ基因的开放阅读框，并将其插入ｐＦＧ１１７５中Ｐ７．５的下游，得到携带ｇＢ基因的质粒ｐＦＧＢ１１７５一１。将此质粒以脂质体转染２８２Ｅ４株感染３一４小时的鸡胚成纤维细胞，同样采用蓝斑筛选技术得到重组的蓝斑病毒。以ＭＤＶｇＢ单克隆抗体进行间接免疫荧光，证实了感染细胞中ｇＢ抗原的存在，从而成功地建立了可表达ＭＤＶｇＢ糖蛋白的以中国疫苗株为基础的重组鸡痘病毒。