骨保护素体外抑制小鼠单核巨噬细胞成熟分化的实验研究

目的研究骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)抑制核因子NF-κB受体活化因子配体(Receptoractivator of nuclear kappa B ligand,RANKL)诱导小鼠单核细胞RAW264.7成熟分化而导致的溶骨效应。方法 50 ng/mL RANKL诱导RAW264.7细胞1 d后,加入100 ng/mL OPG(实验组,即OPG+RANKL组)或不加入OPG(对照组,即RANKL组)分别培养7 d和9 d,经细胞形态学观察其变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞,扫描电镜下观察在骨片上的破骨细胞所致的骨吸收陷窝形成情况。结果对照组培养7 d时,在倒置相差显微镜、透射电镜、光镜下可见细胞形状为椭圆形或不规则形,胞体明显较RAW264.7细胞增大,胞核多为6～10个,扫描电镜下还可见大量伪足形成,而实验组培养7 d后,细胞形状多为圆形,且扫描电镜下未见明显伪足形成;对照组9 d时可见大量TRAP染色阳性的多核巨细胞(含3个或3个以上的细胞核),而实验组中TRAP染色阳性的多核破骨细胞偶见多核巨细胞,培养9 d时很难找到多核巨细胞;仅用RANKL诱导RAW264.7细胞分化7 d时,对照组中破骨细胞表面可见大量伪足伸出,并形成明显的骨吸收陷窝,实验组中破骨细胞见少许伪足突出,不能看到明显的骨陷窝形成。结论单用50 ng/mL RANKL体外连续诱导RAW264.7细胞7 d时,可以促进成熟的破骨细胞显著分化。100 ng/mL OPG培养9 d能有效地抑制破骨细胞的分化,减少破骨细胞的骨吸收效应。