多响应曲面优化-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测食源性致病菌

被引：7

作者：

渠凌丽

黎源倩

郑波

何成艳

何玲

李永新

机构：

[1] 四川大学华西公共卫生学院卫生检验教研室

来源：

高等学校化学学报 | 2009年 / 30卷 / 06期

关键词：

多响应曲面优化; 毛细管电泳; 激光诱导荧光检测; 食源性致病菌; 多重PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

TS207.4 [食品的微生物检验];

学科分类号：

083201 ;

摘要：

建立了食品中常见致病菌:沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157∶H7的rfbO157基因、志贺菌的ipaH基因及副溶血性弧菌Vpara(16S-23S rDNA IGS)基因的多重PCR产物-毛细管电泳快速检测方法.根据沙门菌、大肠杆菌O157∶H7、志贺菌及副溶血性弧菌的特异性基因保守序列设计出多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系.采用多响应曲面法优化毛细管电泳的分离条件,以含有DNA荧光染料SYBR GreenⅠ的1.0%甲基纤维素为筛分介质,通过毛细管电泳-激光诱导荧光同时检测4种常见致病菌的PCR扩增产物.在优化的多重PCR反应体系和毛细管筛分电泳条件下,此方法可以同时检测出沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157∶H7的rfbO157基因、志贺菌的ipaH基因及副溶血性弧菌Vpara(16S-23S rDNA IGS)基因的多重PCR扩增产物,25 min内即可完成检测.迁移时间的日内相对标准偏差为0.92%～1.58%.通过多响应曲面的优化,有效改善了毛细管电泳对DNA分子的分离能力.

引用

页码：1121 / 1127

页数：7

共 13 条

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