熊果酸对小鼠H22移植瘤的抑制作用研究

目的:观察熊果酸(ursolic acid,UA)对小鼠H22移植瘤的抑制作用并对其机制进行探讨。方法:将75只昆明种小鼠于左前腋下皮下接种H22肝癌细胞,24h后随机分为5组,每组15只,模型组、环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)对照组[25mg/(kg·d)]和UA低、中、高剂量药物组[50、100、150mg/(kg·d)]。UA各剂量组和CP对照组分别以相应剂量UA和CP灌胃,模型组以等体积花生油灌胃,每天灌胃1次,连续给药2周。末次给药24h后,称小鼠体质量,摘除眼球取血后处死。无菌条件下完整剥离小鼠肿瘤及肝、肾、脾组织,计算抑瘤率及肝、肾、脾指数;HE染色观察肿瘤组织病理学改变;分离脾淋巴细胞,CCK8法测定小鼠脾++++淋巴细胞增殖活性;免疫组化法检测肿瘤组织中CD4、CD8T细胞亚群的分布情况,计数CD4T细胞和CD8T细胞个数。并采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)的浓度。结果:UA各剂量组小鼠H22肿瘤质量增长均较缓慢,其中UA中、高剂量组肿瘤质量明显减小,与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);UA中、高剂量组抑瘤率分别为30.15%和39.80%。UA各剂量组肝、肾指数与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05),而脾指数则随UA剂量增加逐渐升高,其中,UA中、高剂量组脾指数与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。HE染色病理观察结果显示,模型组肿瘤细胞生长旺盛,细胞体积较大,胞质丰富,少见坏死区域;UA干预组肿瘤组织中瘤细胞生长增殖明显受到抑制,肿瘤细胞数量减少,密度降低,排列稀疏,细胞核固缩深染或破裂,细胞间质较多,核浆比例减少,坏死区域明显增多。CCK8实验结果显示,随着UA剂量增加,脾淋巴细胞增殖活性逐渐升高,其中,UA中、高剂量组脾淋巴细胞增殖活性显著升高,与模型组间的差异具有统计学意义++(P<0.05)。免疫组化结果显示,UA中、高剂量组肿瘤组织中CD4、CD8T细胞个数与模型组比较均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。UA高、中、低剂量组血清中IL-12的含量均较模型组升高,差异均有统计学意义(P<0.05);UA高剂量组与CP对照组相比亦显著升高(P<0.05)。结论:一定剂量UA可抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长,其作用机制可能与UA促进机体免疫器官发育和淋巴细++胞增殖,增加CD4、CD8T细胞向肿瘤组织浸润,并提高血清中IL-12等抗肿瘤活性细胞因子的浓度诱导细胞免疫有关。