肿瘤源性血管内皮细胞的培养及其细胞生物学特性鉴定

目的探讨肿瘤来源血管内皮细胞的诱导和体外培养方法,并对其进行细胞生物学特性鉴定。方法胰蛋白酶灌流消化法收集人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,采用肿瘤细胞的培养上清液诱导HUVEC增殖,制备肿瘤衍生的血管内皮细胞（Td-EC）。采用形态学观察和荧光染色Ⅷ因子相关抗原,鉴定血管内皮细胞,用RT-PCR检测肿瘤血管内皮细胞标志物（TEM）的表达,采用迁徙试验、透射电镜、流式细胞仪细胞周期分析等方法检测、比较HUVEC和Td-EC的生物学特性。结果原代培养的HUVEC约于24h完全贴壁,4～5d后融合成单层铺路石样结构。Ⅷ因子荧光染色证实培养的细胞是HUVEC。经肿瘤细胞上清液诱导后,用RT-PCR检测到TEM1和TEM8 mRNA在Td-EC中的表达;Td-EC细胞迁徙能力较HUVEC显著增强;Td-EC细胞增生活跃,G0S期细胞比例明显增高,具有肿瘤血管内皮细胞特性。结论胰蛋白酶灌流消化法可获得大量连续传代扩增的HUVEC,并可诱导生成肿瘤源性的血管内皮细胞。