免疫PCR检测HIV-1 p24的实验研究

目的以HIV-1 p24为检测对象,建立以金磁微粒为固相载体的免疫PCR检测技术。方法以鼠抗HIV-1 p24单克隆抗体作为捕获抗体,包被金磁微粒,以生物素化的羊抗p24多克隆抗体作为检测抗体。报告DNA为甘蓝型油菜肉桂酰辅酶A还原酶基因的一个片段,用生物素标记的引物通过PCR扩增预先制备,通过链亲和素的桥联标记生物素化的多抗,被两抗体夹心捕获的人重组HIV-1 p24抗原通过PCR扩增报告DNA的方式予以检测。并且优化了免疫PCR的检测条件,对检测灵敏度进行了分析。结果为降低非特异性扩增,链亲和素和用于标记的DNA的浓度分别控制在0.1mg/L和10ng/L。免疫PCR检测的灵敏度为0.1ng/L,比ELISA法检测的灵敏度高1.5×104倍。结论金磁微粒为载体的免疫PCR检测HIV-1 p24抗原是一种灵敏度较高的检测方法。