电鳐(Narcine timlei)乙酰胆硷受体的分离纯化

丁氏双鳍电鳐（Narcine timlei）新鲜电器官的匀浆,经冷冻干燥制成冻干粉（每克冻干粉相当于17.5克新鲜电器官）。10克冻干粉的细胞膜碎片用含1％Triton X-100的溶液提取,此悬浮液经100,000g离心,取其上清液对Sepharose-4B-眼镜蛇神经毒素进行亲和吸附。每毫升压缩的亲和胶含有华南眼镜蛇（Naja naja atra）的神经毒素0.25mg。吸附后的亲和凝胶用几种缓冲液洗去非特异性吸附的蛋白,最后用含1M氨基甲酰胆硷的溶液解脱乙酰胆硷受体（AchR）。有含AchR的氨基甲酰胆硷解脱液对含0.02％去氧胆酸钠的磷酸缓冲液充分透析,以除去氨基甲酰胆硷。从10克冻干粉中最后得到约10mg纯化的AchR。 提纯的AchR能与131I-眼镜蛇神经毒素结合,生成的AchR-131I-眼镜蛇神经毒素复合物用Sephadex G-200凝胶过滤分开后,求得其比结合力为4.7nmol/mg蛋白。此种结合能为眼镜蛇神经毒素、d-筒箭毒和十甲鎓所抑制,当这些竞争性抑制剂的浓度为131I-眼镜蛇神经毒素浓度的300倍时,其抑制率分别为88％、48％和55％。提纯的AchR在含有0.1％Triton X-100的聚丙烯酰胺凝胶电泳时,显示单一的区带;乙酰胆硷酯酶活力很低,其比活力仅为0.05OD412/分·mg蛋白。