乙型肝炎病毒表面抗原免疫逃逸突变基因在人肝癌细胞的表达

为了进一步研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的ｓ基因变异在免疫逃逸中的作用，我们通过酶切消化质粒载体ｐＥｃｏｂ６（含双拷贝ＨＢＶＤＮＡ），得到约９００ｂｐ的ＨＢＶ－ｓ基因片断。将其插入到噬菌粒载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ＋的Ｓｍａｌ位点上。然后通过体外寡核昔酸介导的人工定点突变获得一系列（共１２种）ｓ基因“免疫逃逸”突变型。再通过ＥＢ病毒真核表达载体ｎＭＥＰ４将ｓ基因突变型片断定向克隆到ｐＭＥＰ４上，从而构建了含ＨＢＶ－ｓ基因突变型的重组质粒ｐＭＥＰ４ＨＢＳＭ。用其转染人肝癌传代细胞系ＨｅｐＧ２，经潮霉素选择，３周后获得抗性细胞克隆。经用ＨＢＶ－ｓ单克隆抗体检测发现除含变异体１４５（即１４５位上甘氨酸为精氨酸替代）外，其余变异体ＨＢｓＡｇ均为阳性。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ杂交证实变异体１４５在分子量约为２４０００处也存有一特异性ＨＢｓＡｇ蛋白带。这一表达细胞系的成功建立，为ＨＢＶ免疫逃逸的诊断和治疗提供了基础。