Acrp30基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

被引：2

作者：

詹林盛

王会中

彭剑淳

王全立

机构：

[1] 军事医学科学院输血医学研究所

[2] 军事医学科学院输血医学研究所北京

[3] 北京

来源：

军事医学科学院院刊 | 2003年 / 01期

关键词：

Acrp30; 碱基序列; 印迹法,蛋白质; 大肠杆菌; 基因表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

目的 :克隆人Acrp30基因 ,并在大肠杆菌中表达。方法 :提取人脂肪组织总RNA ,经RTPCR扩增目的cDNA片段 ,进行核苷酸序列分析 ;将该基因克隆入原核表达载体pQE30 ,在大肠杆菌M15中表达 ,用Ni2 + 固相化的螯合SepharoseFastFlow亲和层析纯化重组蛋白 ;并用Western印迹检测所制备多克隆抗体的特异性。结果 :从人脂肪组织总RNA中扩增得到 736bp的目的cDNA ,其序列与已报道的序列完全一致 ,并在大肠杆菌中成功获得高水平表达 ,蛋白相对分子质量大约为 30× 10 3,其表达量占菌体总蛋白的 15 %左右。重组蛋白经Ni2 + 固相化的螯合SepharoseFastFlow亲和层析纯化 ,纯度 >90 %。Western印迹试验证实所制备多克隆抗体具有较高特异性。结论 :本研究为进一步探讨Acrp30在肥胖症和糖尿病患者中的表达情况以及Acrp30的作用机制奠定基础

引用

页码：13 / 15+18 +18

页数：4

共 9 条

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