质粒介导KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌儿童分离株耐药基因研究

目的研究碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌临床儿童分离株的耐药特点及分子流行病学特征。方法收集温州医学院附属第二医院2010年7月—2011年6月从儿童标本中分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌12株,所有菌株为非重复菌株,菌种鉴定采用全自动微生物分析仪。改良的Hodge试验筛选产碳青霉烯酶阳性菌株,采用PCR法检测KPC、IMP、bla（s）、VIM、SPM和整合酶基因,测序确定基因型。对菌株进行质粒结合试验、质粒消除试验检测质粒的转移性。脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析耐药菌株的同源性。结果 12株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑的敏感率分别为8.3%、41.7%、58.3%、8.3%、8.3%、33.3%;12株菌均携带有KPC-2基因,且同时携带有TEM-1和SHV型β-内酰胺酶基因,其中SHV-11-like和SHV-12-like各6株;11株携带CTX-M型基因,其中4株为CTX-M-14-like基因,6株CTX-M-15-like基因;2株携带有OXA-10型基因,1株携带有PER-1基因。末检出NDM-1、GIM、SPM、SIM、VIM型碳青霉烯酶基因。12株均为Ⅰ类整合酶基因（int1）阳性。2株通过接合试验把质粒传递给受体菌EC600。所有接合子blaTEM-1基因阳性、超广谱β-内酰胺酶（ESBL）基因阳性及对亚胺培南、庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素和头孢噻肟耐药,接合子ESBL基因型与供菌一致。2株菌经质粒消除后对亚胺培南的MIC值均有较大程度降低,消除后KPC-2基因扩增为阴性。12株KPC-2基因阳性菌株经PFGE分成5个阿基因型,主要为B型和C型。结论 KPC-2型碳青霉烯酶基因已经在儿童肺炎克雷伯菌中播散,常伴随携带多种类型的ESBL基因和Ⅰ类整合酶基因,部分耐药基因可通过质粒播散。