根癌农杆菌介导的烟曲霉转化条件的优化

目的探讨根癌农杆菌介导烟曲霉的遗传转化及其影响因素。方法构建根癌农杆菌二元载体PDHt/SK,二元载体转化根癌农杆菌,分别对共培养温度(23、24、25、26、27、28)℃、媒介(尼龙膜、硝化纤维膜、液相静置培养)、共培养时间(12、24、36、48h)、预培养加乙酰丁香酮与否、加入乙酰丁香酮的浓度(100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml);分生孢子与根癌农杆菌的不同比例(1∶1、1∶10、1∶100、1∶1000)进行根癌农杆菌介导烟曲霉的转化,观察上述条件下的根癌农杆菌介导的烟曲霉转化效率,用潮霉素抗性基因筛选转化子。结果共培养温度、转化媒介、共培养时间、共培养加入乙酰丁香酮不同的浓度、分生孢子与根癌农杆菌的不同比例均对根癌农杆菌介导烟曲霉转化效率产生影响,但是预培养加乙酰丁香酮与否对根癌农杆菌转化烟曲霉的效率影响不明显。结论根癌农杆菌可成功介导烟曲霉的遗传转化,其转化过程受诸多因素的影响。