人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用比较

被引：16

作者：

陆柔剑 ^{[1
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张陵林 ^{[1
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谭文杰 ^{[1
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周为民 ^{[1
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王仲 ^{[2
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彭堃 ^{[3
]}

阮力 ^{[1
]}

机构：

[1] 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

[2] 北京协和医院

[3] 北京市第六医院

来源：

病毒学报 | 2008年 / 04期

关键词：

人冠状病毒; HCoV-NL63和HCoV-HKU1; 实时荧光定量RT-PCR; 常规RT-PCR;

D O I：

10.13242/j.cnki.bingduxuebao.001935

中图分类号：

R450 [];

学科分类号：

摘要：

分别设计HCoV-NL63和HCoV-HKU1特异的引物与荧光标记探针,并合成含靶基因的模板RNA,建立常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR方法,对其灵敏性、特异性和可重复性以及用于临床样本的适用性等进行平行比较评价。结果表明:这两种方法皆可对HCoV-NL63或HCoV-HKU1进行特异性诊断,其中荧光定量RT-PCR方法检测灵敏度均可达10拷贝/25μL反应体积,不同批次重复检测结果间的变异系数均小于5%。上述方法应用于158份临床鼻咽拭子标本,其中荧光定量RT-PCR方法检出6份HCoV-NL63阳性标本,5份HCoV-HKU1阳性标本,而常规RT-PCR方法则分别检出HCoV-NL63阳性与HCoV-HKU1阳性各3份。对常规RT-PCR方法获得的阳性样品进行序列分析证实上述方法的可靠性。本实验成功建立了可用于临床标本检测的人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1常规RT-PCR方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法,并初步证实荧光定量RT-PCR检测方法检出率明显高于常规RT-PCR方法,这为开展HCoV-NL63和HCoV-HKU1的流行监测及临床早期诊断提供了有效技术手段。

引用

页码：305 / 311

页数：7

共 4 条

[1] 中国内陆发现HCoV-HKU1感染及N和S蛋白基因序列及进化分析 [J].