基于p62/Keap1/Nrf2信号通路探讨香砂愈疡汤对胃溃疡大鼠氧化损伤的保护作用

目的:探讨香砂愈疡汤对乙酸诱导胃溃疡模型大鼠的保护作用并探讨其作用机制,为临床用药提供实验依据。方法:将60只SPF级Wistar大鼠随机分成6组:空白组,模型组,香砂愈疡汤高、中、低剂量组,奥美拉唑组。通过乙酸诱导制作胃溃疡大鼠模型,香砂愈疡汤高、中、低剂量组分别灌胃28,14,7 g·kg-1香砂愈疡汤溶液,奥美拉唑组将奥美拉唑以4.17 g·kg-1溶于生理盐水后灌服,空白组和模型组以等体积生理盐水灌胃,1次/d。连续治疗14 d后处死大鼠,采血并取胃组织,测量并计算胃溃疡面积、胃溃疡抑制率,制作胃黏膜组织病理学切片并观察胃黏膜损伤状态;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中胃黏膜修复因子、胃组织相关蛋白水平、氧化应激因子、炎症因子等指标的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃黏膜组织中p62,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),核转录因子E2相关因子2(Nrf2),血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组胃黏膜出现较为明显的病理变化,白细胞大量浸润;模型组溃疡面积显著增加(P<0.01),黏蛋白5AC(MUC5AC),表皮生长因子(EGF),超氧化物歧化酶(SOD)和前列腺素E2(PGE2)含量显著减少,胃泌素(GAS),8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG),丙二醛(MDA),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和环氧化酶-2(COX-2)含量显著增多(P<0.01),Nrf2,HO-1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Keap1含量明显增高(P<0.05),p62蛋白表达降低;与模型组比较,香砂愈疡汤高剂量组和奥美拉唑组细胞层次结构更加清晰,排列规则,形状规整;中、低剂量组对胃黏膜也均有一定的修复作用;香砂愈疡汤高、中剂量组可显著减少乙酸诱导胃溃疡大鼠模型的胃溃疡面积(P<0.01),提高溃疡抑制率,明显促进胃黏膜组织中MUC5AC和EGF的表达,降低GAS水平(P<0.05,P<0.01),显著降低8-OHdG和MDA水平,提高SOD活性(P<0.01),显著降低TNF-α和COX-2表达水平,增加PGE2的含量,升高胃黏膜组织Nrf2,HO-1蛋白表达(P<0.01),香砂愈疡汤高剂量组可明显降低Keap1的蛋白表达(P<0.05),升高p62蛋白表达量。结论:香砂愈疡汤治疗乙酸诱导胃溃疡模型大鼠效果显著,可有效减少溃疡面积,增加溃疡抑制率,保护溃疡组织。其作用机制可能与激活p62/Keap1/Nrf2信号通路,调控相关基因表达,从而改善炎症反应、调控氧化应激反应有关。