非洲猪瘟病毒PCR检测试剂盒的研制

选取非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因VP73中保守性强的区域,人工合成该基因片段;再根据GenBank中公布的ASFV的VP73基因序列,设计特异性引物,利用PCR扩增该VP73基因片段,克隆入pET-32a(+)载体,以构建的重组质粒为模板建立了检测ASFV的PCR检测方法。优化扩增条件,并组装成PCR试剂盒。结果显示,PCR扩增出429bp的ASFV VP73基因片段;该试剂盒与猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒(疫苗株)、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪乙型脑炎病毒、猪细小病毒、健康猪和蜱的基因组无交叉反应。试剂盒敏感性可达0.1fg。试剂盒批内和批间检测结果无明显差异,稳定性良好。置于4℃和-20℃条件下保存12个月,试剂盒稳定性无明显改变。结果表明,研制的ASFV PCR试剂盒为ASFV的快速检测及流行病学调查提供了技术手段。