24-脱氢胆固醇还原酶抗氧化应激作用的功能结构域鉴定

被引：6

作者：

芦秀丽 ^{[1
]}

刘剑利 ^{[1
]}

曹向宇 ^{[1
]}

侯芳芳 ^{[1
]}

高兵 ^{[2
]}

机构：

[1] 辽宁大学生命科学院

[2] 沈阳医学院基础医学院

来源：

中国生物工程杂志 | 2009年 / 29卷 / 05期

关键词：

24-脱氢胆固醇还原酶; 抗氧化应激; 功能域鉴定; 细胞内定位;

D O I：

10.13523/j.cb.20090510

中图分类号：

Q55 [酶];

学科分类号：

070307 [化学生物学];

摘要：

24-脱氢胆固醇还原酶(DHCR24)具有抗氧化应激引起的细胞凋亡的作用,但其机制尚不清楚。先前的实验数据显示在细胞水平DHCR24可能具有清除过氧化氢的作用。在生物信息学方法预测的基础上,构建了以pIVEX2.4a为载体的人DHCR24基因及其两种功能域缺失的突变型重组表达载体pIVEX2.4a-DHCR24(野生型)、pIVEX2.4a-ORD(预测氧化还原功能域保留型)和pIVEX2.4a-CTR(碳端保留型),通过体外快速翻译表达系统RTS500进行体外大量表达,经提纯得到各种DHCR24纯化蛋白。Fluoro CatalaseTM荧光过氧化氢酶体外检测实验首次证明野生型DHCR24具有较强的过氧化氢清除能力,且DHCR24-ORD突变型具有与野生型同等强度的过氧化氢清除活性,而DHCR24-CTR突变型则失去了此能力,提示DHCR24的氧化还原功能域在其清除过氧化氢作用方面起着重要作用。为了进一步研究其抗氧化应激作用的生理学意义,利用双重免疫荧光染色法对DHCR24在细胞内的定位情况进行了调查。结果表明,DHCR24定位于内质网,提示其内质网的定位可能与其抗氧化应激作用有关。

引用

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页数：5

共 4 条

[1]

Mutations in the 3β-hydroxysterol Δ24-reductase gene cause desmosterolosis, an autosomal recessive disorder of cholesterol biosynthesis [J].