激光扫描共聚焦显微镜检测核因子κB

目的　探讨激光扫描共聚焦显微镜 (CLSM )检测核因子κB(NF κB)的方法。方法　用肿瘤坏死因子α(TNF α)刺激PC1 2细胞NF κB活化 ,间接免疫荧光 (FITC)标记代表NF κB的P6 5 亚基 ,碘化丙啶 (PI)标记细胞DNA指示核区 ,用CLSM对NF κB进行定位显示和定量分析 ,以WesternBlot检测结果作为对照标准。结果　TNF α刺激后PC1 2细胞经CLSM显示 :核区内出现代表NF κB的绿色荧光 ,其核区与胞浆区比值 (FN/FC)明显大于未经TNF α刺激的PC1 2细胞 ;而未经TNF α刺激的PC1 2细胞红色的核区内未出现绿色荧光。WesternBlot显示TNF α刺激后PC1 2细胞核提取物呈阳性反应 ,即出现代表NF κB/P6 5 蛋白的条带 ,未经TNF α刺激的PC1 2细胞核提取物呈阴性反应 ,即核提取物中未出现代表NF κB/p6 5 蛋白的条带 ,CLSM检测NF κB与WesternBlot检测结果一致。结论　CLSM检测NF κB既可定位显示 ,又可定量分析 ,能显示单个细胞的NF κB状态 ,且具有同时显示细胞形态等优点 ,是研究细胞核因子的有效方法。