大鼠内皮祖细胞的分离培养与鉴定

被引：8

作者：

赵洪雯 ^{[1
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余荣杰 ^{[1
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李敛 ^{[1
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刘宏 ^{[1
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干磊 ^{[1
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吴雄飞 ^{[1
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曾玲 ^{[2
]}

机构：

[1] 第三军医大学西南医院肾科

[2] 第三军医大学西南医院骨科

来源：

重庆医学 | 2007年 / 18期

关键词：

大鼠; 内皮祖细胞; 分离; 培养; 鉴定;

D O I：

暂无

中图分类号：

R329 [人体组织学];

学科分类号：

摘要：

目的研究大鼠骨髓来源的内皮祖细胞的分离培养和鉴定方法。方法纤维连接蛋白提前包被培养瓶和培养板中的盖玻片。密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓单个核细胞,EGM-2完全培养基,贴壁法,37℃,5%CO2,饱和湿度的恒温培养箱中原代培养。部分培养瓶细胞消化后计数。其余培养瓶和培养板中盖玻片细胞继续培养,细胞近融合时传代,分别在第6、9、12和24天进行细胞鉴定。内皮祖细胞鉴定:免疫细胞化学的vWF和VEGFR-2染色;内吞DiI标记的乙酰低密度脂蛋白(DiI-AcLDL)和结合FITC标记的荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1)的激光共聚焦显微镜观察。结果培养细胞的形态学改变:骨髓单个核细胞种植24h后部分细胞开始贴壁、变大,倒置显微镜下贴壁细胞透亮度增强,并逐渐伸出伪足样突起,呈小杆状或梭形。培养第3天贴壁细胞开始增殖,呈"集落"样生长,外周梭形细胞较多。第6天梭形细胞显著增多,培养至第12天左右,梭形细胞首尾相连,呈"毛细血管"样排列。培养第6天的细胞数量级为106～107/瓶。内皮祖细胞的鉴定:激光共聚焦显微镜观察显示细胞DiI-acLDL和FITC-UEA呈红绿免疫双荧光阳性。培养第6天细胞VEGFR-2和vWF免疫细胞化学染色呈阳性。结论大鼠的骨髓单个核细胞可以培养为内皮祖细胞,且数量级达到106～107,可以满足动物实验研究的需要。

引用

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