实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α mRNA基因表达

被引:7
作者
陈晓
王宇学
机构
[1] 湖北中医学院医学检验与技术系
关键词
实时荧光定量; 反转录聚合酶链反应; TNF-α基因;
D O I
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中图分类号
Q75-33 [];
学科分类号
摘要
目的建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription po lym erase cha in reaction,RT-PCR)法检测TNF-α基因mRNA表达。方法用T-A克隆技术构建含TNF基因的载体作为标准模板,采用荧光T aqm an方法及探针标记技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,制备标准曲线,检测肿瘤患者与正常人外周血单个核细胞的TNF-αmRNA表达水平变化,并与半定量RT-PCR检测结果进行比较。结果实时荧光定量RT-PCR检测肿瘤患者外周血单个核细胞TNF-αmRNA表达明显高于正常人,且半定量RT-PCR结果显示TNF-α出现类似的变化趋势。结论所建立的实时荧光定量RT-PCR用于检测TNF-αmRNA表达,结果用拷贝数表示,比半定量RT-PCR更灵敏、准确。
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