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里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达
被引：21
作者：
张煜
刘刚
余少文
汤新
邢苗
机构：
[1] 深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室
来源：
关键词：
纤维素酶;
整合表达;
液质联用;
羧甲基纤维素;
D O I：
10.13346/j.mycosystema.2005.03.011
中图分类号：
Q819 [生物工程应用];
学科分类号：
摘要：
本工作采用巴氏毕赤酵母Pichiapastoris表达系统进行了里氏木霉Trichodermareesei纤维二糖水解酶Ⅱ(CellobiohydrolaseII)的表达。用RT-PCR的方法从经稻草粉诱导的里氏木霉培养物中分离出纤维二糖水解酶Ⅱ的基因,将其插入到巴氏毕赤酵母的表达载体pPICZαA中,并使之处于α-因子信号肽序列的下游,得到重组质粒pPICZαA-cbh2。通过电穿孔的方法用线性化的pPICZαA-cbh2转化巴氏毕赤酵母GS115菌株,经过大量筛选后得到可以高效表达纤维二糖水解酶的毕赤酵母菌株P.pastorisCBHⅡ1。在甲醇诱导的条件下培养P.pastorisCBHⅡ1,培养液中的CMC活性可达到3.82U/mL,SDS-PAGE分析结果表明纤维二糖水解酶在P.pastorisCBHⅡ1中的表达量远远高于里氏木霉。对表达产物进行了LC-MS分析,结果表明所表达的蛋白为里氏木霉的纤维二糖水解酶。
引用
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页码：367 / 375
页数：9
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