光皮树无性系ISSR-PCR反应体系的建立

被引：12

作者：

李昌珠 ^{[1
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李培旺 ^{[1
,2
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张良波 ^{[1
]}

刘汝宽 ^{[1
]}

肖志红 ^{[1
]}

李力 ^{[1
]}

机构：

[1] 湖南省林业科学院

[2] 长沙创林科技有限公司

来源：

经济林研究 | 2009年 / 27卷 / 02期

关键词：

光皮树; 退火温度; 种质资源; 基因定位;

D O I：

10.14067/j.cnki.1003-8981.2009.02.021

中图分类号：

S792.99 [其他];

学科分类号：

摘要：

以光皮树基因组DNA为材料,采用单因素实验,测试了退火温度、模板用量、dNTP浓度、Taq酶用量、Primer浓度、Buffer用量和Mg2+浓度等因素对ISSR-PCR的影响。优化的反应体系和条件:总体系为25μL,引物0.2μmol/L、模板20ng、Mg2+2.5mmol/L、Taq酶0.5U、dNTP为0.1mmol/L和Buffer为2.5μL。扩增程序:94℃预变性5min,1个循环;94℃变性50s,52℃退火1min,72℃延伸1.5min,40个循环;72℃后延伸10min,1个循环。该体系的建立为今后利用ISSR进一步研究光皮树遗传连锁图谱构建、遗传多样性、种质资源鉴定与和基因定位奠定了技术基础。

引用

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