中国流行的C基因型HBV稳定复制表达细胞系的建立

被引：3

作者：

王琳 ^{[1
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刘文 ^{[2
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刘妍 ^{[2
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纪冬 ^{[2
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思兰兰 ^{[2
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钟彦伟 ^{[2
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徐东平 ^{[2
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机构：

[1] 军事医学科学院

[2] 解放军医院传染病研究所病毒性肝炎研究室

来源：

解放军医学杂志 | 2010年 / 35卷 / 12期

基金：

北京市自然科学基金;

关键词：

肝炎病毒,乙型; 基因型; 病毒复制; 细胞系; 抗原;

D O I：

暂无

中图分类号：

R512.62 [];

学科分类号：

摘要：

目的建立中国流行的C基因型HBV的稳定复制表达细胞系。方法从1例慢性乙肝患者血清中分离克隆得到1株C基因型病毒DNA全序列,以此为模板扩增产生1.3倍体HBV DNA,包含完整基因组(3.2kb)、从1825位点(polyA)至2599位点大小为775bp的3′端冗余序列,以及至1400位点大小为425bp的5′端冗余序列,将其连接改建重组后的pcDNA3.1(+)载体,构建pN31-51-6-1表达质粒,转染肝癌细胞系HepG2。采用ELISA检测HBsAg、HBeAg的瞬时表达情况,选择双高表达细胞孔进一步行G418筛选稳定表达细胞系。通过ELISA、免疫组化、直接免疫荧光流式细胞术以及HBV复制中间体核心颗粒DNA、细胞内cccD-NA、分泌上清中病毒DNA的RT-PCR检测等方法评估稳定细胞克隆的复制表达情况。结果获得1株具有高抗原表达和高复制能力的细胞克隆HepG2-51-6-1,已稳定传代26代。检测HBsAg、HBeAg吸光度(A)值分别为>3.5和1.29;直接免疫荧光流式细胞术证实细胞表面存在s抗原,免疫组化染色可见细胞内病毒表达。分泌到培养上清中的HBV DNA和细胞内的HBV复制中间体水平分别为2.0×104和5.5×105拷贝/ml,HBVccc DNA为6～8拷贝/细胞。结论成功获得HBV-1.3倍体转染的C基因型HBV稳定复制表达细胞系,为研究我国流行HBV的生物特性和抗HBV新药筛选奠定了基础。

引用

页码：1425 / 1428

页数：4

共 7 条

[1]

华北地区HBV基因亚型特点及其与核苷(酸)类抗HBV药物耐药突变的关系 [J].