钙网蛋白参与缺氧预处理对氧化应激损伤大鼠成心肌H9c2细胞的保护作用

目的:观察缺氧预处理(HPC)对氧化应激诱导大鼠成心肌H9c2细胞损伤的保护作用,探讨钙网蛋白(CRT)是否参与其保护效应及p38MAPK是否参与其信号转导过程。方法:H9c2细胞随机分为8组:氧化应激(H2O2)组、短暂缺氧(HPC)组、HPC+H2O2组、SB203580+HPC+H2O2组、反义干扰(AS)组、AS+H2O2组、AS+HPC+H2O2组和对照组。以细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性及流式细胞术检测细胞损伤情况;采用RT-PCR和Westernblotting分别检测CRT表达和p38MAPK磷酸化水平。结果:(1)HPC可减轻氧化应激损伤,与H2O2组比较,HPC+H2O2组细胞凋亡率和LDH漏出分别降低13.4%和44.0%,存活率增高12.7%(均P<0.05);HPC前以特异性p38MAPK抑制剂SB203580预孵育消除HPC的保护作用,与HPC+H2O2组相比,细胞凋亡率和LDH漏出分别增高5.4%和45.0%,存活率降低5.0%(均P<0.05);(2)氧化应激明显上调CRT表达(较对照组高3.6倍)(P<0.05);单纯短暂缺氧可诱导CRT表达(较对照组高1.4倍,P<0.05),但上调程度较H2O2组低48%(P<0.05);HPC可降低CRT过表达程度(降低26%)(P<0.05);(3)反义寡核苷酸干扰CRT表达后HPC对氧化应激的保护作用降低,相关分析显示HPC诱导的CRT适度表达与细胞存活率正相关(r=0.8573,P<0.05);(4)HPC前应用p38MAPK抑制剂,抑制CRT表达上调(分别较HPC+H2O2组和HPC组低38%和23%)(均P<0.05)。结论:HPC可通过p38MAPK信号途径诱导CRT表达上调,减轻大鼠成心肌H9c2细胞氧化应激损伤。