增强型绿色荧光蛋白基因转染及TGFβ3诱导前软骨干细胞向成软骨方向分化

目的　探讨增强型绿色荧光蛋白基因 (EGFP)转染前软骨干细胞 (PSCs)的效果及TGFβ3 诱导PSCs向成软骨方向定向分化的可行性。方法　利用磁性细胞分选系统分离纯化有成纤维细胞生长因子受体 3(FGFR 3)表面标志的PSCs。采用脂质体介导法将EGFP基因转染PSCs,G4 18筛选得到EGFP基因修饰PSCs。用免疫组化及免疫荧光检测EGFP基因修饰PSCs的FGFR 3表达。采用藻酸盐凝胶培养 ,以TGFβ3 诱导分离纯化的PSCs向成软骨方向定向分化。应用免疫组化、RT PCR检测PSCs向成软骨方向分化过程中特异性软骨基质成分的表达情况。结果　EGFP基因转染PSCs后 ,2 4hGFP开始表达 ,4 8～ 72hGFP表达最强。G4 18筛选后 ,EGFP基因修饰PSCs体外培养 6周仍有较强GFP表达。在含TGFβ3 的藻酸盐凝胶培养 7、14、2 1d均有II型胶原表达 ;诱导2 1d的PSCs免疫组化检测可见细胞及周围均有X型胶原、Aggrecan、COMP表达 ;RT PCR检测显示在培养早期 ( 8d内 )开始出现Aggrecan、X型胶原、COMP等的表达 ,中期 ( 8d后 )开始出现II型胶原表达。结论　EGFP基因修饰PSCs在体外能长期稳定表达GFP ,为应用组织工程技术修复骨骺损伤提供方便追踪观察的种子细胞。TGFβ3 能诱导PSCs向成软骨方向定向分化。