烟草叶肉原生质体再生植株的研究

烟草原生质体是以烟草叶片薄壁细胞为材料,在无菌条件下,用2％纤维素酶（Onozuka R—10）、0.5％离析酶（Macerozyme R—10）、0.2％葡聚糖硫酸钾、5mM氯化钙、1mM磷酸二氢钾、0.7M甘露醇、pH5.8;或0.75％纤维素酶（EA3867）、0.3％离析酶、0.3％葡聚糖硫酸钾、0.7M甘露醇、pH5.6的混合酶液,降解细胞壁分离出来的。并在NT（提高了氯化钙、VB1含量和降低硫酸镁含量以及增添了烟酸和维生素B6）液体培养基中培养。2天后发生细胞壁再生,3—4天后出现再生细胞的第一次分裂,5—7天第二次分裂,14天后可见15—20个细胞组成的小细胞团,此时要改变碳源和降低渗透浓度,30—40天后形成40—50个细胞组成的细胞团,大的细胞团约达1毫米,转移至固体分化培养基,随后进一步分化出小苗,将具有4—5片叶片、3—4厘米高的小苗转移到生根培养基,发育成完整的小植株。