内标多重荧光RT-PCR同时检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型

被引：15

作者：

肖性龙 ^{[1
,2
]}

何雅青 ^{[3
]}

余以刚 ^{[1
]}

杨洪 ^{[3
]}

李惠芳 ^{[2
]}

杨晓泉 ^{[1
]}

张经纬 ^{[2
]}

陈谷 ^{[1
]}

刘冬梅 ^{[1
]}

李小凤 ^{[1
]}

吴晖 ^{[1
]}

机构：

[1] 华南理工大学轻工与食品学院食品安全研究室

[2] 深圳太太基因工程有限公司

[3] 深圳市疾病预防控制中心

来源：

微生物学报 | 2009年 / 49卷 / 01期

关键词：

内标; 多重荧光RT-PCR; EV71; 柯萨奇病毒A16型; 检测;

D O I：

10.13343/j.cnki.wsxb.2009.01.021

中图分类号：

R450 [];

学科分类号：

100215 ;

摘要：

【目的】为对当前爆发的手足口病进行快速准确的检测。【方法】本研究建立了含内标的同时检测EV71和CA16的多重荧光RT-PCR方法,对该方法的特异性、灵敏度等进行评估,并对400多份临床样品进行了检测。【结果】实验结果表明,该检测方法特异性强,对10株EV71病毒、8株CA16病毒和25株其他人类病毒进行了检测,特异性为100%;该检测方法对EV71和CA16的检测灵敏度分别达到0.1 TCID50和1 TCID50;将0.1～104TCID50/mL EV71和CA16样本进行重复性实验,其变异系数分别为0.9%2.0%和0.9%2.3%。对400多份临床样品分别进行荧光RT-PCR检测和传统方法检测,结果显示,荧光RT-PCR对EV71和CA16的阳性检出率平均为46.1%和14.2%,比传统方法（34.5%和12.8%）的阳性检测率高。另外,实验数据显示,在粪便、直肠拭子、咽喉拭子样本中,PCR抑制物存在的比例为1.8%3.4%,表明内标对监控PCR抑制物的存在具有重要作用。【结论】本方法能同时对EV71和CA16进行快速检测,并且灵敏度高,特异性好,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合于手足口病的临床检测。

引用

页码：98 / 104

页数：7

共 5 条

[1] Development of multiplex real-time hybridization probe reverse transcriptase polymerase chain reaction for specific detection and differentiation of Enterovirus 71 and Coxsackievirus A16 [J].

Tan, Eng Lee ;

Chow, Vincent Tak Kwong ;

Quak, Seng Hock ;

Yeo, Wei Cheng Andrea ;

Poh, Chit Laa .

DIAGNOSTIC MICROBIOLOGY AND INFECTIOUS DISEASE, 2008, 61 (03) :294-301

[2]

Use of molecular assay in diagnosis of hand, foot and mouth disease caused by enterovirus 71 or coxsackievirus A 16[J] . Kuo-Chien Tsao,Pi-Yueh Chang,Hsiao-Chen Ning,Chien-Fen Sun,Tzou-Yien Lin,Luan-Yin Chang,Yhu-Chering Huang,Shin-Ru Shih.Journal of Virological Methods . 2002 (1)

[3] Serotype-specific identification of enterovirus 71 by PCR [J].

Brown, BA ;

Kilpatrick, DR ;

Oberste, MS ;

Pallansch, MA .

JOURNAL OF CLINICAL VIROLOGY, 2000, 16 (02) :107-112

[4]

Genetic analysis of enterovirus 71 isolated from fatal and non-fatal cases of hand, foot and mouth disease during an epidemic in Taiwan, 1998[J] . Shin-Ru Shih,Mei-Shang Ho,Kuei-Hsiang Lin,Shu-Li Wu,Yen-Tsun Chen,Cheng-Nan Wu,Tzou-Yien Lin,Luan-Yin Chang,Kuo-Chien Tsao,Hsiao-Chen Ning,Pi-Yueh Chang,Shih-Ming Jung,Chuen Hsueh,Kenneth S. Chang.Virus Research . 2000 (2)

[5]

A non-radioisotopic quantitative competitive polymerase chain reaction method: application in measurement of human herpesvirus 7 load[J] . I.Michael Kidd,Duncan A Clark,Vincent C Emery.Journal of Virological Methods . 2000 (1)

← 1 →