中西药合用对帕金森病大鼠神经细胞凋亡的影响

目的:观察滋补肝肾、通络解毒中药与美多巴合用对帕金森病大鼠神经细胞凋亡的影响。方法:实验于2003-03/2004-06在上海中医药大学科研实验中心完成。①选用雄性Wistar大鼠58只,7～8周龄。将其中40只大鼠用于制备帕金森病模型(以6-羟基多巴胺注射于大鼠脑右侧黑质,10d后腹腔注射阿朴吗啡0.5mg/kg诱发大鼠向一侧旋转,以开始旋转至30min内旋转圈数平均每分钟超过7次者为合格帕金森病模型),造模成功18只,随机分为2组:模型组、中西药治疗组,每组9只;另纳入9只正常大鼠为正常对照组(只固定大鼠,不进行任何处理),9只大鼠注射含0.2g/L抗坏血酸的等量生理盐水(其余条件与造模手术相同大鼠)为假手术组。②然后,正常对照组、假手术组、模型组:灌胃生理盐水2mL。中西药治疗组:灌胃中西药混悬液2mL[滋补肝肾、通络解毒中药:汤药内含熟地、桑寄生、枸杞子、天麻、钩藤、僵蚕、丹参、莪术、白芍、生南星,按既定工艺煎煮成汤药,每毫升含原药材2.961g,由上海中医药大学附属龙华医院制剂室制备;蝎蜈胶囊内含全蝎、蜈蚣,0.3g/粒,由上海中医药大学附属龙华医院提供,批号:010813。按比例将胶囊混匀于汤药中,使浓度为3.006g/mL;含美多巴(上海罗氏制药公司产品,批号:052000,250mg/片)135mg/kg),1次/d,共45d。③实验结束后,每组取6只大鼠,处死,取出中脑组织,甲醛固定,梯度脱水,常规石蜡包埋,冠状切片,每块脑组织5张切片;每组取3只大鼠进行心脏灌注固定,后分离中脑黑质,制作电镜标本。用原位末端标记法染色和透射电镜(×9000)的方法观察中西药合用对神经细胞凋亡的影响。④组间比较采用方差分析。结果:造模失败22只,由于造模失败脱失22只,进入结果分析36只,每组9只。①模型组标本中均能检测到原位末端标记法染色阳性细胞核,细胞核呈棕褐色,但主要集中在损毁侧黑质区内,细胞核体积缩小,或明显皱缩,形态呈圆形或不规整。模型组神经细胞凋亡数明显多于正常对照组、假手术组和中西药治疗组[(37.83±6.46),(1.67±1.9),(1.83±1.92),(1.28±4.75)个,P<0.01]。中西药治疗组也能检测到凋亡细胞核,但与模型组比较,凋亡细胞数较少,单个散在分布。②电镜检查结果显示中西药合用组神经细胞病理变化明显比模型组轻,细胞膜稍有皱缩,细胞体积略缩小,线粒体等细胞器形态正常,细胞核稍呈皱缩状态,染色质有轻度凝聚成块并有边聚倾向,核膜基本完整。结论:中西药合用对帕金森病大鼠神经元细胞凋亡有明显抑制作用。