环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测志贺氏菌

被引：6

作者：

李尚阳 ^{[1
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周前进 ^{[1
]}

张严峻 ^{[2
]}

潘军航 ^{[2
]}

陈炯 ^{[1
]}

机构：

[1] 宁波大学生物与海洋科学系

[2] 浙江省疾病预防控制中心

来源：

微生物学通报 | 2016年 / 07期

关键词：

志贺氏菌; 侵袭性质粒抗原H基因; 环介导等温扩增技术; 横向流动试纸条; 检测;

D O I：

10.13344/j.microbiol.china.160027

中图分类号：

R378 [病原细菌];

学科分类号：

100103 ; 100705 ;

摘要：

【目的】将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)联合应用,建立一种可应用于志贺氏菌快速检测的LAMP-LFD技术。【方法】以福氏志贺氏菌的侵袭性质粒抗原H(ipa H)基因为检测靶标设计3对特异性引物(其中上游内引物Sfl-ipa H-FIP由生物素标记),进行LAMP反应;同时设计1条异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针Sfl-ipa H-HP,与获得的LAMP产物进行特异性杂交,杂交产物经LFD完成检测。【结果】优化后的LAMP反应条件为63°C 40 min,加上LFD结果判读共需50 min。LAMP-LFD方法能够特异性检测出福氏志贺氏菌,而对肠炎沙门氏菌等其它4种导致腹泻的致病菌和创伤弧菌等5种常见食物源性致病菌,以及4株不同大肠杆菌的检测结果呈阴性。该方法针对福氏志贺氏菌的检测灵敏度为1.0×10～2 CFU/m L或4 CFU/反应,针对人工污染鲤鱼肠组织的检测灵敏度是5.0×10～2 CFU/m L,是以LAMP外引物Sfl-ipa H-F3/Sfl-ipa H-B3的常规PCR方法的100倍。【结论】建立的LAMP-LFD技术具有操作简单、检测快速准确、检测成本低等优点,有望在志贺氏菌的常规监测和即时检测中被普及使用。

引用

页码：1616 / 1626

页数：11

共 15 条

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