3种致泻大肠埃希氏菌多重PCR检测试剂盒的研制与效用评价

本研究为了研制一种多重PCR检测试剂盒,用于对肠道致病性大肠埃希氏菌(Enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)、产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shigatoxin-producing E. coli,STEC)和肠道出血性大肠埃希氏菌(Enterohemorrhagic E. coli,EHEC)3种DEC(Diarrheagenic E. coli,DEC)的快速检测。优化所涉及的多重PCR检测体系和构建相应的检测试剂盒,其中的主要检测试剂采用冻干工艺,评价该试剂盒的检测特异性、灵敏度、重复性以及保质期。结果表明,本研究成功建立了针对于3种DEC的检测体系EP和检测体系ST;3种DEC标准菌株和分离菌株均出现明显的目标基因条带,而其他种类DEC标准菌株和分离菌株均未出现目标基因条带;该试剂盒检测管EP和检测管ST的检出限分别可达到1.5×103 cfu/mL和2.1×103cfu/mL,且二者检测重复率均为100%;该试剂盒可在4℃条件下保存12个月,也可在42℃环境运输120h,期间其检测效力不受影响。本研究研制的试剂盒性能好,检测结果稳定、可靠,适用于食品中3种DEC的快速检测。