致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

被引：7

作者：

武鑫 ^{[1
]}

张宇霞 ^{[2
]}

史晗 ^{[3
]}

曾巧英 ^{[1
]}

李儒 ^{[2
]}

机构：

[1] 甘肃农业大学动物医学院

[2] 甘肃出入境检验检疫局

[3] 中国农业大学动物医学院

来源：

中国兽医科学 | 2015年 / 45卷 / 03期

关键词：

沙门菌; 实时荧光定量PCR; MALDI-TOF-MS;

D O I：

10.16656/j.issn.1673-4696.2015.03.007

中图分类号：

S852.61 [病原细菌];

学科分类号：

摘要：

为建立一种灵敏、特异、快速地检测食品中致病性沙门菌的方法,针对沙门菌致病性菌株特有的invA基因设计引物,PCR扩增目的片段,构建重组质粒pMD19-T-inv285,将其作为标准品进行real-time PCR反应体系的优化和标准曲线的绘制,并进行灵敏度、特异性及稳定性检测;同时用该方法对90份肉品样品进行检测。结果显示,建立的致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的标准曲线方程为y=-3.397 1 x+27.313,相关系数r2=0.999 6。该方法的灵敏度为5×100copies/μL,是普通PCR(5×102 copies/μL)的100倍。对10种常见食源性细菌的检测结果均为阴性;组内和组间重复试验的变异系数均低于1%。对90份肉品样品的检出率(6/90,6.67%)显著高于快速MALDI-TOF-MS法和传统的细菌分离鉴定方法(均为3/90,3.33%)。结果表明,本试验建立的致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR灵敏度高,且特异、稳定,适用于食品中致病性沙门菌的快速检测。

引用

页码：270 / 274

页数：5

共 7 条

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