糖原合成酶激酶3β在白藜芦醇诱导的大鼠心肌线粒体保护中的作用及其机制

目的探讨白藜芦醇是否通过抑制糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）的活性进而阻止线粒体通透性转移孔（mPTP）的开放来发挥心脏保护作用,及其可能的信号转导机制。方法常规培养大鼠胚胎心脏组织来源的H9c2细胞株,实验随机分为对照组、白藜芦醇组、白藜芦醇+PKG抑制剂（KT5823）组和KT5823组。激光扫描共聚焦显微镜成像法测定细胞线粒体膜电位(△（?）m)的变化及细胞内一氧化氮（NO）的含量。SABC法检测白藜芦醇对H9c2细胞GSK-3βSer9位点磷酸化的影响。Western blot法检测磷酸化GSK-3β、血管扩张刺激磷蛋白（VASP）的表达水平。结果共聚焦显微镜测定△（?）m结果显示,白藜芦醇组[减少到（81.9±1.1）%]能够抑制△（?）m的减少,与对照组[减少到（38.6±1.9）%]比较差异有统计学意义（P<0.05）。白藜芦醇+KT5823组△（?）m[减少到（41.8±1.2）%]明显低于白藜芦醇组（P<0.05）。Western blot结果显示白藜芦醇组的磷酸化GSK-3β及VASP蛋白表达水平[分别为（160.6±3.6）%和（157.9±1.3）%]明显高于对照组（P<0.01）。白藜芦醇+KT5823组的磷酸化GSK-3β及VASP蛋白表达水平[分别为（91.6±5.6）%和（98.0±0.5）%]明显低于白藜芦醇组（P<0.01）。KT5823组与对照组比较差异无统计学意义。SABC结果进一步显示,白藜芦醇组GSK-3βSer9位点的磷酸化水平明显高于对照组（P<0.01）。共聚焦显微镜测定细胞内NO的结果显示,白藜芦醇组DAF-FM的绿色荧光强度与对照组比较差异无统计学意义[分别为（71.2±5.3）%和（77.0±5.4）%]。结论白藜芦醇通过cGMP/PKG信号通路抑制GSK-3β活性,进而阻止mPTP的开放来保护心脏。NO可能未参与白藜芦醇的线粒体保护作用。