地高辛掺入聚合酶链反应检测白血病多药耐药基因

目的建立灵敏、客观和量化的检测白血病细胞中多药耐药基因（ＭＤＲ１）表达的方法和判定ＭＤＲ１基因表达阳性的标准，合理评价ＭＤＲ１基因在白血病耐药表型中所起的作用。方法用地高辛标记的脱氧三磷酸尿苷（ＤＩＧ １１ ｄＵＴＰ）掺入逆转录聚合酶链反应（ＲＴ ＰＣＲ）的方法，检测耐长春新碱的多药耐药细胞株ＨＬ ６０／ＶＣＲ细胞中ＭＤＲ１表达，设立ＭＤＲ１表达的半定量稀释曲线，以此为标准检测了９种不同类型的肿瘤细胞株和４３例初治急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）患者ＭＤＲ１的表达。结果梯度稀释ＨＬ ６０／ＶＣＲ的ＲＮＡ含量与其相对应ＭＤＲ１基因扩增产物有较好的线性关系，将ＲＮＡ稀释２７倍时所扩增出的ＭＤＲ１／β ａｃｔｉｎ产物量之比０２作为ＭＤＲ１表达阳性的界定。９种细胞株中，ＨＬ ６０／ＶＣＲＭＤＲ１表达高水平，ＫＧ １有一定水平的表达，其它细胞株中未检测到ＭＤＲ１基因的表达。所检测的４３例ＡＮＬＬ标本中，共有１３例ＭＤＲ１阳性，占总数的３０２％，ＭＤＲ１阳性与ＭＤＲ１阴性患者的完全缓解率分别为２３１％和８６７％（Ｐ＜０．００５），不同ＡＮＬＬ亚型中ＭＤＲ１表达率依次为Ｍ１＞Ｍ５＞Ｍ４＞Ｍ２＞Ｍ３，杂合性白血病中