shRNA沉默VEGF基因表达对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的观察Pavu6+27VEGFsiRNA重组体在细胞体内表达的VEGF短发夹状RNA(shorthairpinRNA,shRNA)对人大肠癌HCT116细胞株生物学特性的影响。方法将自行构建的表达短发夹状RNA的重组质粒转染到大肠癌HCT116细胞株中,以空质粒Pavu6+27转染为对照,经G418筛选出稳定表达shRNA细胞,行RTPCR检测VEGFmRNA表达的改变,Westernblot检测VEGF蛋白表达,流式细胞技术分析细胞周期分布,MTT比色法检测细胞的生长抑制率。结果成功转染重组体的HCT116细胞中VEGFmRNA表达明显下降,约降低为对照组的61.2%(P<0.05)。VEGF蛋白表达明显下降,光密度分析比较差异有显著性(P<0.05)。G0/G1期细胞比例增高,另一方面S期和G2/M期细胞比例降低,细胞的增殖指数明显降低,实验组细胞增殖指数为(25.63±4.54)%,对照组细胞的增殖指数为(31.90±2.19)%(P<0.05)。结论Pavu6+27VEGFsiRNA重组体在细胞内表达的短发夹状RNA能有效抑制人大肠癌细胞VEGFmRNA和VEGF蛋白表达,细胞增殖能力减弱,为质粒介导的RNAi技术运用于大肠癌的基因治疗提供一定的实验依据。