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分子克隆实验指南.[M].[美]萨姆布鲁克(Sambrook;J·)等 著;金冬雁等 译.科学出版社.1992,
茶树基因组DNA提纯与RAPD反应系统建立
被引：8
作者：
谭和平
余桂容
徐利远
蔡平钟
吴洁
机构：
[1] 四川省农业科学院!四川成都
来源：
关键词：
茶树;
基因组DNA;
提纯;
RAPD;
反应系统;
D O I：
10.16213/j.cnki.scjas.2001.01.025
中图分类号：
Q943.2 [植物基因工程];
S571.1 [茶];
学科分类号：
071007 ;
090102 ;
0902 ;
090203 ;
摘要：
DNA的提取质量是决定RAPD分析成功与否的关键。茶树幼嫩新梢中含有大量的茶多酚等次生物质 ,采用磨样时添加抗酚类氧化褐变的物质 ,在细胞核裂解之前去除细胞质中的茶多酚和蛋白质 ,而后再用改进的DNA微量快速提取法———SDS法分别从不同茶树品种新梢中提取和纯化基因组DNA ,所得到的DNA样品适宜于RAPD反应。通过对茶树RAPD分析中影响扩增结果的因素的研究 ,建立了茶树RAPD的最适反应系统 ,即在 2 5ul反应体系中 ,含 2 0 - 50ng模板DNA ,1 5mmol/lMgCl2 ,各 0 1mmol/lDNTPs ,0 2umol/L引物和 1UTaqDNA聚合酶 ;扩增程序为 :95℃预变性 30 0s ,94℃变性 6 0s,35℃退火 6 0s ,72℃延伸 12 0s ,共进行 4 0个循环 ,最后 72℃延伸 6 0 0s,这样可以取得较好的扩增效果
引用
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