人HMGB1的制备及功能鉴定

被引：4

作者：

邢效如

何凤田

杨朝辉

李蓉芬

郑英如

高会广

黎松

张艳

张立

机构：

[1] 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

[2] 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科

[3] 匹兹堡大学

[4] 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆

[5] 重庆

[6] 匹兹堡市

[7] 滨夕法尼亚州

[8] 美国

来源：

第三军医大学学报 | 2005年 / 19期

关键词：

HMGB1; 原核表达; 纯化; TNF-α;

D O I：

10.16016/j.1000-5404.2005.19.009

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

目的在克隆人HMGB1(highmobilitygroupbox-1)全长cDNA的基础上,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法用RT-PCR方法扩增人HMGB1cDNA,克隆至载体pUC19行序列测定后,再构建于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,以IPTG诱导HMGB1蛋白表达,Ni2+-NTA和多粘菌素B亲和层析柱进行纯化后,用培养的人单核细胞系THP1检测重组蛋白活性。结果构建了人HMGB1蛋白的重组表达质粒pQE-80L/HMGB1,获得了纯度约96%的纯化蛋白产物,该蛋白能刺激THP1细胞产生TNF-α。结论成功制备了具有生物学活性的人HMGB1蛋白纯品,为进一步的功能研究奠定了基础。

引用

页码：1931 / 1934

页数：4