中药复方对瘦素刺激肝星状细胞增殖功能的影响及其机制

目的:观察中药复方保肝宁对瘦素刺激的肝星状细胞(Hepatic stellate cells,HSCs)增殖功能的影响及其发生的可能机制。方法:实验于2005-07/2006-07在南方医科大学细胞生物实验室完成。①药物血清的制备:保肝宁的方药由黄芪、桃仁、丹参、黄芩、白背叶根、鳖甲、柴胡、白芍、枳实等组成,煎煮配制成1.77g/mL,3.54g/mL剂量药液。秋水仙碱配制成0.05g/mL。取wistar大鼠24只,随机分为4组,每组6只,分别为正常血清组、保肝宁等剂量组、保肝宁二倍剂量组、秋水仙碱含药血清组。正常血清组给予等量生理盐水,其余各组给予相应药物1mL/100g,胃灌1次/d,连续7d。腹主动脉采血,离心分离血清。②用四甲基偶氮唑盐比色法检测0,10,50,100,200及400μg/L的瘦素在6,12,18,24h对HSC-LX2增殖的影响及保肝宁对100μg/L的瘦素刺激HSC-LX2增殖的阻断作用;应用蛋白印迹实验检测细胞膜瘦素受体长片段b(OB-Rb)蛋白表达水平。结果:①不同剂量瘦素在不同时间点对HSC-LX2增殖的影响:瘦素剂量为10～400μg/L时,对HSC-LX2的促进增殖作用呈现剂量、时间依赖性。各剂量组之间差异有显著性(P<0.01),同一剂量、不同时间比较差异有显著性(P<0.01)。②保肝宁对HSC-LX2生长的影响:与正常血清组比较,保肝宁等剂量组、保肝宁二倍剂量组均能明显抑制HSC-LX2的增殖(A600值,0.818±0.239,0.115±0.114,0.107±0.055,n=5,P<0.01),秋水仙碱组(0.388±0.073)亦能抑制HSC-LX2细胞的增殖(P<0.05);与秋水仙碱组比较,保肝宁等剂量组、保肝宁二倍剂量组明显抑制HSC-LX2的增殖(P<0.05)。③保肝宁作用HSC-LX20不同时间后OB-Rb的表达:与正常血清组,保肝宁作用6h后,OB-Rb水平有显著的降低,秋水仙碱组则无明显的降低。结论:中药复方保肝宁有阻断瘦素刺激HSCs-LX2增殖的作用,而OB-Rb的表达降低可能是其主要的作用机制之一。