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基因枪法转化籼稻胚性愈伤组织获得可育的转基因植株
被引:29
作者:
许新萍
卫剑文
范云六
李宝健
机构:
[1] 中山大学生物工程研究中心!广州,,中山大学生物工程研究中心!广州,,中国农业科学院生物技术研究中心!北京,,中山大学生物工程研究中心!广州,
来源:
关键词:
籼稻;
胚性愈伤组织;
基因枪法转化;
bar基因;
B.t.δ-内毒素基因;
D O I:
暂无
中图分类号:
Q943 [植物细胞遗传学];
学科分类号:
071007 ;
090102 ;
摘要:
以籼稻胚性愈伤组织作为基因枪法转化的靶材料,建立了可重复的、高效的籼稻转化系统。从籼稻成熟胚诱寻生长3~4周的愈伤组织,经过2~6周继代培养后,可以形成足够量的颗粒状胚性意伤组织。用含有bar基因B.t.δ-内毒素基因的质粒pFWZ16轰击转化胚性愈伤组织,在含2~4mg/LBasta的培养基上进行筛选、预再生、再生及长根培养,并通过干燥处理增加再生频率和出苗数。从接种到获得转化小植株只需要4~5个月。供试的两个品种为华南地区推广的优良籼稻品种,共轰击821块胚性愈伤组织,获得48个系的477株Basta抗性植株。经PCR扩增分析和Southernblot杂交分析证实外源的bar基因和B.t.基因己整合到转基因水稻植株基因组中,Basta抗性鉴定和PNA点杂交分析表明这两个基因在转基因植株中得到表达。87.5%的转基因植株可育。Basta喷施实验和Southernblot分析证明bar基因和B.t.基因已遗传至子代,并且主要按孟德尔规律进行分离。
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