rhLEDGF p52基因原核表达载体的构建、诱导表达及蛋白纯化

被引：2

作者：

赵海生

王一

机构：

[1] 中国人民解放军第三军医大学附属西南医院眼科

来源：

眼科新进展 | 2007年 / 01期

关键词：

晶状体上皮; p52基因; 表达; 蛋白纯化;

D O I：

10.13389/j.cnki.rao.2007.01.010

中图分类号：

R776 [晶状体与玻璃体疾病];

学科分类号：

摘要：

目的构建rhLEDGFp52基因原核表达载体,获得rhLEDGFp52蛋白。方法利用基因重组技术将rhLEDGFp52基因构建于原核表达载体pET30a(+)中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,通过IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,经免疫蛋白印迹试验对rhLEDGFp52进行鉴定并用Ni-NTAHis.Bind.Resin方法进行纯化。结果成功构建rhLEDGFp52基因原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得可溶性形式表达,rhLEDGFp52蛋白表达量占菌体蛋白总量的34.63%.WesternBlot结果显示rhLEDGF2蛋白能够特异性与LEDGF-ab结合。Ni-NTAHis.Bind.Resin方法进行纯化后的rhLEDGFp52,最终质量浓度达520mg·L-1,分析其纯度达87.93%.结论成功获得rhLEDGFp52蛋白,这为深入研究其生物学功能奠定了基础。

引用

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