核酸杂交的酶放大时间分辨荧光分析

目的为了建立一种新的非同位素的核酸杂交的测定方法－酶放大时间分辨荧光分析法（ＥＡＴＲＦＡ）或酶放大镧系元素发光分析法（ＥＡＬＬ），使核酸杂交分析能更广泛地应用于临床诊断。方法将生物素－链霉亲和素的高亲和力和放大作用、酶放大作用、镧系元素螯合物的固有优点和时间分辨测量技术结合起来。通过碱性磷酸酶把５－氟水杨酸磷酸酯转变为５－氟水杨酸（５－ＦＳＡ），５－ＦＳＡ与Ｔｂ３＋和ＥＤＴＡ形成发荧光的三元复合物。结果对靶ＰＢＲ３２２ＤＮＡ测定的标准曲线范围宽，可达三个数量级；灵敏度为１０ｐｇ；准确度为９０％～１１５％。研究和优化了紫外灯照射时间，生物素化探针、ＡＰ－ＳＡ、５－ＦＳＡＰ和Ｔｂ－ＥＤＴＡ等的浓度以及洗涤方法等主要影响因素。发现了新的荧光稳定技术。结论核酸杂交的ＥＡＴＲＦＡ或ＥＡＬＬ是一种灵敏的无需转移的简单的全新分析方法，有很好的应用前景。