改良法人胎肾小球系膜细胞原代培养

目的:原代培养和鉴定正常人胎肾小球系膜细胞(HMC),探索和总结最佳培养方法。方法:取4月胎龄的引产胎儿肾,分离皮质后,筛网滤过分离肾小球,Ⅳ型胶原酶消化,接种肾小球时分别采用传统方法(第1组)和预先浸湿瓶底并以胎牛血清中和胶原酶替代离心洗涤(第2组)两种方法,观察系膜细胞生长状态。并采用免疫细胞化学检测第3代肾小球系膜细胞的结蛋白(Desmin)、肌动蛋白(Actin)、波形蛋白(Vimentin)、细胞角蛋白(Cytokeratin)、Ⅷ因子(FactorⅧ)等相关抗原的表达,鉴定系膜细胞,并绘制其生长曲线,计算倍增时间。结果:两组肾小球贴壁率分别71%和90%,系膜细胞开始爬出时间为11d和7d,次代倍增时间为3.94d和3.52d,细胞生长状况有统计学差异。第2组传代的系膜细胞1d内贴壁,1周后长满。细胞呈三角、梭形、不规则形半透明,树枝状突起。免疫化学鉴定Desmin、Vimentin和Actin阳性,FactorⅧ和Cytoker-atin阴性。结论:两种肾小球接种方法对系膜细胞培养有不同影响,我们总结改进的培养方法肾小球贴壁率高,细胞存活和生长良好,并确定培养的细胞为人HMC。