VEGF受体结合抑制肽的筛选及其特性鉴定

目的　筛选能抑制VEGF与血管内皮细胞表面受体结合的VEGF模拟短肽 ,探讨小分子短肽作为血管内皮细胞生长抑制剂、肿瘤疫苗的可行性。方法　以抗 VEGF单克隆抗体分别对噬菌体随机 7肽、12肽库进行筛选。通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定。用噬菌体克隆免疫小鼠检验这种短肽可否模拟VEGF的抗原决定簇诱发机体产生能与VEGF结合的抗体 ,研究小鼠抗血清、噬菌体表达的 7肽和 12肽以及人工合成 7肽对人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)生长的抑制作用。结果　对肽库进行 3轮筛选后 ,噬菌体克隆具有良好的富集效果。硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到 10 0 % ,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列 :GWYYDAL、VASAVFYSALVE。这两种噬菌体短肽免疫小鼠能激发产生高效价的抗 VEGF抗体。噬菌体表达的 7肽和 12肽对HUVEC的生长有明显的抑制作用。由短肽GWYYDAL阳性克隆免疫的抗血清对VEGF诱导的内皮细胞生长起抑制作用 ,人工合成的 7肽 (GWYYDAL)呈剂量依赖性阻拮VEGF促HUVEC增殖作用。结论　从噬菌体肽库中筛选到的噬菌体短肽GWYYDAL、VASAVFYSALVE模拟了VEGF的抗原表位 ,为研究VEGF受体结合抑制肽和设计肿瘤疫苗奠定了实验基础。