人角朊干细胞体外筛选及鉴定的实验研究

目的　探讨体外筛选及鉴定人角朊干细胞 (KSC)的方法。　方法　利用 KSC对细胞外基质的快速黏附性 ,选择不同时间黏附的细胞分为 5、2 0和 6 0分钟 3组 ,并以不进行筛选的细胞作对照组。体外培养扩增后 ,以 KSC的相对特异性标识分子 β1 整合素、角蛋白 19(Ck19)的单克隆抗体 ,免疫组织化学方法对各组细胞进行鉴定 ,利用图像分析系统测平均灰度值。并用流式细胞仪、透射电镜对各组细胞进行检测。　结果　各组细胞在 10～ 14天均有克隆形成 ,组间比较 5分钟组细胞生长较慢 ,但形成克隆较大 ,细胞体积较小。免疫组织化学β1 整合素、Ck19在各组都有表达 ,各组平均灰度值统计学分析显示 ,β1 整合素在 5分钟组的表达与另 3组间有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ,Ck19的表达在 5分钟组与 2 0分钟组间无差异 (P>0 .0 5 ) ,6 0分钟组与对照组间差异不显著 ,而前两组与后两组之间比较有统计学意义 (P<0 .0 5 )。流式细胞仪检测提示 5分钟组细胞大部分处于 G1 期 ,与其它 3组有区别。透射电镜显示 5分钟组细胞体小 ,核浆比大 ,细胞器不成熟。　结论　利用细胞外基质筛选的 5分钟组细胞处于幼稚状态 ,并有强克隆形成能力 ,符合预期的KSC特点 ,可利用 KSC对细胞外基质的快速黏附性对其纯化筛选 ,同时利用 β1 整合素、Ck1