籼稻绿芽悬浮细胞原生质体再生成株

采用籼稻Hu-18绿芽为外植体,在N6附加2mg/L 2,4-D的培养基上诱导愈伤组织。20d后转入AA培养基进行悬浮培养。继代培养45d左右形成了分裂旺盛的胚性细胞悬浮系。即从绿芽诱导至胚性细胞悬浮系的建立仅用了65d左右。继代后前6d,细胞干重几乎每2d增加1倍,而培养液的渗透压及pH值迅速下降。取继代后4d的悬浮细胞游离原生质体,产率为8.74×10～6个/g鲜重。纯化后的原生质体在KPR培养基中进行琼脂糖包埋培养,原生质体植板率为12.0%。将20d后的小愈伤组织(0.1mm)转入N6附加0.5mg/L 2,4-D,1 mg/L BA,1 mg/L KT,0.3 mg/L ZT的培养基上增殖,待长成直径2～3 mm左右时,用N6附加1 mg/L BA,1 mg/L KT,0.3 mg/L ZT的培养基进行分化培养,5 d后同时出现芽根生长,最终再生成绿色植株,绿苗分化率为3.5株/10000个原生质体。