柑桔黄龙病的常规PCR及荧光定量PCR检测

被引：60

作者：

胡浩 ^{[1
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殷幼平 ^{[1
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张利平 ^{[1
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赵云 ^{[1
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夏玉先 ^{[1
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王中康 ^{[1
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覃健 ^{[2
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机构：

[1] 重庆大学生物工程学院基因工程研究中心

[2] 柳州市鹧鸪江园艺场

来源：

中国农业科学 | 2006年 / 12期

关键词：

Cadidatus Liberibacter asiaticus; 黄龙病; SYBR Green I; TaqMan; 荧光定量PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

S436.66 [柑桔类病虫害];

学科分类号：

摘要：

目的为柑桔黄龙病的早期诊断和寄主体内病原菌的动态监测提供一种稳定、可靠的检验检疫技术。方法利用亚洲韧皮杆菌核糖体蛋白基因rplJ/rplL设计了2对PCR引物CQULA03F/CQULA03R、CQULA04F/CQULA04R和1条TaqMan探针CQULAP1,以此为基础建立了常规PCR和TaqMan探针法、SYBRGreenI荧光染料法两种荧光定量PCR(共3种)反应体系;确定了3种体系各自的检测灵敏度、特异性和准确性,据此对3种体系进行了比较;从2004年7月到2005年5月还利用常规PCR和TaqMan探针荧光定量PCR体系完成了对柑桔黄龙病病原菌在寄主体内的周年变化的动态监测。结果两种荧光定量PCR方法的灵敏度比常规PCR高出至少2～3个数量级,而TaqMan探针法由于使用了杂交探针,其特异性尤其可靠,另外两种定量PCR较小的产物片段使得它们具有更好的稳定性,加上荧光定量PCR方法本身受污染可能性小、操作简便等固有优势,使得前者更适合于柑桔黄龙病的检测。结论本研究建立的2种荧光定量PCR方法可以为柑桔黄龙病的病害早期诊断以及柑桔黄龙病病原菌近缘种的甄别提供准确、灵敏、快速的检验检疫技术。

引用

页码：2491 / 2497

页数：7

共 3 条

[1] 柑桔黄龙病病原16SrDNA克隆、测序及实时荧光PCR检测方法的建立 [J].

廖晓兰 ;

朱水芳 ;

赵文军 ;

罗宽 ;

漆艳香 ;

陈红运 ;

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农业生物技术学报, 2004, (01) :80-85

[2] 应用多聚酶链式反应（PCR）技术检测和定量分析柑桔黄龙病病原 [J].

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[3]

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