金属硫蛋白突变体的植物高效表达载体的构建及其在烟草中的表达

被引：11

作者：

张晓钰

李伟

张竞

何笃修

茹炳根

机构：

[1] 北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室!北京,北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室!北京,北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系蛋白质工程及植物基因工程国家

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 1999年 / 06期

关键词：

金属硫蛋白突变体; 高效表达载体; 构建; 表达;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.1999.06.009

中图分类号：

Q786 [基因的表达];

学科分类号：

摘要：

金属硫蛋白有α、β两个结构域（ｄｏｍａｉｎ），其中α结构域优先结合Ｃｄ２＋和Ｈｇ２＋．小鼠αα突变体在大肠杆菌中已经构建并得到表达，其转基因植株已得到，可在Ｃｄ３００（３００ μｍｏｌ／Ｌ）中生长．为了进一步提高外源基因在烟草中的表达量，首先用ＰＣＲ的方法设计引物，在基因翻译起始密码子ＡＴＧ附近加入植物偏爱的碱基组合ＡＡＣＡＡＴＧ．另外，将该突变体基因插入具有双３５Ｓ（ＣａＭＶ３５Ｓ）强启动子的植物双元表达载体ｐＧＰＴＶｄ３５Ｓ－ＢＡＲ中，获得了带有αα突变体的植物双元表达载体．通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草ＮＣ８９，获得了抗除草剂的转基因植株．经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和蛋白Ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测，证明了αα突变体在烟草中的嵌合与表达．抗重金属实验证明转基因烟草可以在Ｃｄ４００（４００ μｍｏｌ／Ｌ）中生长．

引用

页码：888 / 892

页数：5

共 11 条

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